Для определения группы крови берут по 2 стандартные сыворотки (с различными сериями), соответствующие каждой из групп крови. К ним добавляют эритроциты пациента в соотношении 1: 10 (1 капля эритроцитов к 10 каплям сыворотки). Капли тщательно перемешивают покачиванием, затем на 1–2 минуты оставляют в неподвижном виде и затем вновь покачивают в течение 5 минут. После этого проводят оценку результатов.

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора на дно пробирки помещают каплю стандартного реагента (сыворотки анти-Rho (D)) и каплю исследуемой крови.

Все тщательно перемешивают встряхиванием и переворачивают в течение 3 минут. В пробирку добавляют 2–3 мл изотопического раствора натрия хлора и перемешивают путем трехкратного переворачивания пробирок.

Если отмечается агглютинация в виде крупных хлопьев, это указывает на резус-положительную принадлежность, при отсутствии агглютинации реакция считается отрицательной.

При гемотрансфузии, кроме указанных методов, производят определение групповой и резусной совместимости донора и реципиента.

Глава 2 Неспецифическая иммунологическая реактивность

Неспецифическая иммунологическая реактивность определяется с помощью следующих реакций:

– гемолитической активности комплемента;

– определения в сыворотке пропердина;

– определения лизоцина;

– определения интерферона;

– определения миелопероксидазы и НСТ-теста;

– постановки реакции бласттрансформации.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция основана на способности комплемента присоединяться только к комплексу «антиген – антитело» и неспособности связываться ни с антигеном, ни с антителом.

Реакция протекает в 2 фазы. В первой фазе участвуют антиген, испытуемая сыворотка и комплемент. Это невидимая часть реакции. Во вторую фазу происходит индикация, в реакцию вводят гемолитическую систему (эритроциты барана и инактивированную гемолитическую сыворотку). Если антиген и антитело являются комплементарными друг другу с формированием комплекса, связывающего комплемент, гемолиз в фазе индикации не происходит, и эритроциты оседают. Реакция считается положительной. В случае если антитело не оказалось специфическим и не произошло образования комплекса «антиген – антитело», свободный комплемент вступает в реакцию и дает гемолиз. Реакция расценивается как отрицательная. В настоящее время реакция ставится в различных модификациях.

Показанием для данного исследования является подозрение на генетические дефекты.

Снижение гемолитической активности комплемента может быть признаком такого заболевания, как системная красная волчанка, или указанием на наличие наследственного дефекта.

Определение уровня пропердина

Пропердин постоянно присутствует в определенных количествах в нормальной сыворотке крови. Это важный гуморальный фактор, участвующий в обеспечении бактерицидных, вируснейтрализующих и гемолитических свойств крови. Метод основан на способности пропердина связываться с различными полисахаридами.

Реакция бласттрансформации на неспецифические митогены

Эта реакция позволяет проводить функциональную оценку Т– и В-лимфоцитов, а также для контролировать использование иммуномодуляторов. Кроме этого, с помощью этой реакции изучается пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на неспецифические митогены, исследуется синтез иммуноглобулинов В-лимфоцитами, стимулированных поликлапальным В-клеточным активатором – митогеном лаконоса. Стимуляция синтеза иммуноглобулинов происходит только при взаимодействии Т-хелперов с В-лимфоцитами.

Реакция проводится в динамике с различными дозами митогена и не всегда свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета.

Определение С-реактивного белка

Наличие в крови С-реактивного белка зачастую является показателем активности инфекционного процесса. Определение его проводится в реакции презентации с моноспецифической антисывороткой. Для этого капилляр заполняют на треть антисывороткой, затем добавляют аналогичный объем испытуемой сыворотки больного, тщательно перемешивают и инкубируют при температуре 37 °C. Через 2 часа учитывают предварительный результат. Окончательный результат определяют после выдерживания капилляров при комнатной температуре.

Глава 3 Оценка специфической реактивности

В основе лежит определение специфичности взаимодействия реакции «антиген – антитело», которая формирует иммунный ответ на чужеродный агент.

Методы оценки специфической реактивности:

1) определение клеточного иммунитета, Т– и В-лимфоцитов;

2) определение количества иммуноглобулинов;

3) определение циркулирующих иммунных комплексов.

Определение Т– и В-лимфоцитов

Для этого применяется несколько методов. Например, розеткообразование с эритроцитом барана или мыши. Розетка образуется в результате связывания поверхностных рецепторов с введенными в субстрат эритроцитами барана. Она состоит обычно из лимфоцита и 3–5 присоединенных эритроцитов.